Plasmide Double Nickase (h) HSPA8/HSC70: sc-418508-NIC

HSPA8 code la chaperonne HSC70, exprimée de façon constitutive, un composant central de la famille HSP70 qui se lie aux polypeptides naissants ou dénaturés par le stress afin de favoriser leur repliement, leur repliement correct après dénaturation et la prévention de leur agrégation. HSC70 participe à des cycles de chaperonnage dépendants de l’ATP avec des co-chaperonnes telles que les DNAJ et des facteurs d’échange de nucléotides, soutenant la protéostasie dans le cytosol et les organites. Elle est également un régulateur clé de l’autophagie médiée par les chaperonnes, du désassemblage de la clathrine lors de l’endocytose, et des voies de contrôle qualité des protéines, notamment le renouvellement via le système ubiquitine–protéasome. La dérégulation de la protéostasie et du trafic liés à HSPA8/HSC70 a été impliquée dans la neurodégénérescence, la tolérance des cellules cancéreuses au stress et la biologie des maladies infectieuses, ce qui en fait une cible largement étudiée au sein des réseaux d’homéostasie cellulaire.

HSPA8/HSC70 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.