Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSP90B1/HSP90 beta Double Nickase Plasmid (h): sc-400214-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP90B1/HSP90 beta Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP90B1/HSP90 beta Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP90B1/HSP90 beta Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSP90AB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP90B1/HSP90 beta: sc-517405
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP90B1/HSP90 beta Double Nickase Plasmid (h) | sc-400214-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP90B1/HSP90 beta Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400214-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSP90AB1 kodiert das zytosolische HSP90 beta (HSP90B1/HSP90 beta), ein ATP-abhängiges molekulares Chaperon, das eine breite Palette von Client-Proteinen stabilisiert und reifen lässt, die an Signaltransduktion, Zellzykluskontrolle und Stressantworten beteiligt sind. Als zentrale Komponente des Proteostase-Netzwerks arbeitet HSP90 beta mit Co-Chaperonen und dem Ubiquitin-Proteasom-System zusammen, um Proteinfaltung, Qualitätskontrolle und Abbau zu regulieren, und beeinflusst dabei Signalwege wie MAPK/ERK, PI3K–AKT und DNA-Schadensantworten. Eine Störung der HSP90-beta-Funktion kann die Stabilität des Proteoms und den Umgang mit proteotoxischem Stress verändern, was für Studien zu Abhängigkeiten onkogener Signalwege, zu fehlgefalteten Proteinen bei Neurodegeneration sowie zu entzündlichen oder metabolischen Stressphänotypen relevant ist. Da viele Kinasen und transkriptionelle Regulatoren auf die HSP90-Aktivität angewiesen sind, wird HSP90AB1 häufig eingesetzt, um die durch Chaperone gepufferte Robustheit von Signalwegen und die zelluläre Anpassung unter Stress zu untersuchen.
HSP90B1/HSP90 beta Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSP90AB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSP90AB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSP90AB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSP90AB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.