Plasmide CRISPR/Cas9 KO HSP 60 (h): sc-400336

Présentation

HSPD1 code la chaperonine mitochondriale HSP60, composant central du système de chaperonines qui favorise le repliement et l’assemblage des protéines codées par le noyau et importées dans la matrice mitochondriale. HSP60 soutient la protéostasie mitochondriale, la capacité de phosphorylation oxydative et les réponses au stress en tamponnant le mauvais repliement des protéines et en limitant les dommages protéotoxiques. La perturbation de HSPD1 altère le contrôle qualité mitochondrial et peut modifier la susceptibilité à l’apoptose, l’homéostasie redox et la signalisation immunitaire innée associée à la dysfonction mitochondriale. Une expression ou une localisation dérégulée de HSP60 a été associée à la neurodégénérescence, aux troubles cardiométaboliques et à l’adaptation au stress liée au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la signalisation mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HSP 60 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HSPD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HSPD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HSPD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HSP 60.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HSPD1 pour l'étude de la signalisation de HSP 60, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HSPD1 essentiels à la fonction de HSP 60
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HSPD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HSP 60 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HSP 60 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HSPD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HSP 60 plasmide HDR (h) et le HSP 60 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HSPD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HSPD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.