HSF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400432-KO-2

Übersicht

Hitzeschockfaktor 1 (HSF1) ist ein zentraler transkriptioneller Regulator, der die zelluläre Hitzeschockantwort koordiniert, indem er Chaperone und Gene der Proteostase induziert, darunter Mitglieder der HSP70- und HSP90-Familie, um die Proteinfaltung zu erhalten und proteotoxischen Stress zu begrenzen. Über die akute Stressanpassung hinaus integriert HSF1 Signale aus Proteasomenfunktion, Translation und metabolischem Zustand und beeinflusst dadurch die Proteinkontrolle, die Organisation des Zytoskeletts sowie Programme des Zellüberlebens. Die HSF1-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen wie der HSP90-abhängigen Stabilisierung von Klientenproteinen, der Autophagie und der Dynamik von Stressgranula und prägt damit, wie Zellen auf Umwelt- und intrazelluläre Stressoren reagieren. Eine fehlregulierte HSF1-Signalgebung wurde mit maligner Transformation und Tumorerhalt sowie mit Neurodegeneration und anderen Proteinfehlfaltungs-assoziierten Erkrankungen in Verbindung gebracht, weshalb HSF1 häufig als Ansatzpunkt für mechanistische Studien genutzt wird.

Das HSF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HSF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HSF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HSF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HSF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HSF1-Exone abzielen, die für die HSF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HSF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HSF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSF1 HDR-Plasmid (h) und HSF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HSF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HSF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.