HoxA11 Double Nickase Plasmid (h): sc-405264-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HoxA11 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HoxA11 Double-Nickase-Plasmid (h) und HoxA11 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HOXA11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HoxA11: sc-393440
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HoxA11 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405264-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxA11 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405264-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXA11 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxA11, einen DNA-bindenden Regulator, der während der Entwicklung zur anterior-posterioren Musterbildung und zu gewebespezifischen Differenzierungsprogrammen beiträgt. Im adulten Kontext beeinflusst HOXA11 Transkriptionsnetzwerke, die Zellschicksalsentscheidungen, den Umbau der extrazellulären Matrix und hormonresponsive Genexpression koordinieren, insbesondere in mesenchymalen und reproduktiven Geweben. Eine fehlregulierte HOXA11-Expression oder eine veränderte regulatorische Kontrolle wurde mit Entwicklungsanomalien in Verbindung gebracht und wird bei Krebserkrankungen sowie Fortpflanzungsstörungen untersucht, bei denen aberrante Transkriptionsprogramme und eine veränderte Linienidentität eine Rolle spielen. Als sequenzspezifischer Transkriptionsregulator wird HoxA11 häufig untersucht, um Enhancer-Promoter-Interaktionen zu kartieren und nachgeschaltete Gennetzwerke zu definieren, die Gewebearchitektur und -funktion prägen.
HoxA11 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HOXA11-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HOXA11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HOXA11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HOXA11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.