hnRNP A2/B1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400635-NIC

HNRNPA2B1 codifica a hnRNP A2/B1, uma proteína abundante de ligação a RNA que se associa a transcritos nascentes para coordenar o splicing do pré-mRNA, a estabilização do mRNA e o transporte núcleo-citoplasmático. Ela também contribui para a localização do RNA e para o controle da tradução por meio de interações com componentes do spliceossoma e outros fatores de grânulos ribonucleoproteicos, ligando-a à dinâmica de grânulos de estresse e a programas de regulação gênica pós-transcricional. A hnRNP A2/B1 atua como um “leitor” de m6A para transcritos selecionados, influenciando decisões sobre o destino do RNA que moldam a diferenciação e as respostas celulares ao estresse. A desregulação de HNRNPA2B1 tem sido associada a redes alteradas de processamento de RNA na biologia do câncer e em vias relevantes para neurodegeneração, incluindo montagem aberrante de RNPs e remodelamento do transcriptoma.

hnRNP A2/B1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HNRNPA2B1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HNRNPA2B1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HNRNPA2B1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HNRNPA2B1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.