Plásmido Doble Nickase (m) hnRNP A1: sc-420895-NIC

El gen murino **Hnrnpa1** codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea A1 (hnRNP A1), una proteína de unión a ARN expresada de forma ubicua que acopla el empalme del pre-ARNm, la exportación de ARNm y la traducción mediante interacciones dinámicas con componentes del espliceosoma y con gránulos ribonucleoproteicos. hnRNP A1 regula la elección alternativa de exones y programas del metabolismo del ARN que influyen en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y el mantenimiento de la homeostasis del ARN. Su actividad está vinculada al transporte nucleocitoplasmático y al ensamblaje de gránulos de estrés, conectando el procesamiento del ARN con vías activadas durante el estrés celular y la diferenciación. La desregulación del empalme mediado por hnRNP A1 y de su unión al ARN se ha asociado con neurodegeneración y con una reprogramación transcripcional relevante para el cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de defectos en el procesamiento del ARN.

hnRNP A1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hnrnpa1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hnrnpa1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hnrnpa1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hnrnpa1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.