HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401082

Visão geral

ONECUT1 codifica o fator nuclear de hepatócitos 6 (HNF-6), um fator de transcrição homeobox CUT que coordena programas de regulação gênica em tecidos derivados do endoderma, particularmente fígado e pâncreas. O HNF-6 modula a diferenciação epitelial, a morfogênese ductal e a expressão de genes metabólicos por meio do controle transcricional de vias do desenvolvimento e hepatobiliares, incluindo interação cruzada com as sinalizações Notch e TGF-β. Em células humanas, a atividade alterada de ONECUT1 tem sido associada à desregulação da homeostase da glicose, ao desenvolvimento endócrino pancreático e à disfunção hepatobiliar, tornando-o um alvo relevante para o estudo de perturbações em redes transcricionais. Seus alvos a jusante e as interações cooperativas com outros fatores de transcrição hepáticos e pancreáticos posicionam o HNF-6 como um nó-chave para dissecar a especificação de linhagem e a regulação metabólica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ONECUT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ONECUT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ONECUT1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HNF-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ONECUT1 para a investigação da sinalização de HNF-6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ONECUT1 críticos para a função HNF-6
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ONECUT1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HNF-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ONECUT1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HNF-6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HNF-6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ONECUT1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ONECUT1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.