Plasmide CRISPR d'Activation (m) HNF-4α: sc-420892-ACT

Hnf4a code le facteur nucléaire des hépatocytes 4 alpha (HNF‑4α), un facteur de transcription de type récepteur nucléaire régulé par ligand, qui orchestre des programmes géniques épithéliaux et métaboliques dans le foie, l’intestin, le pancréas et le rein. HNF‑4α se lie à des éléments de réponse spécifiques de l’ADN afin de réguler des réseaux contrôlant l’homéostasie des lipides et du glucose, le métabolisme des acides biliaires, la détoxification des xénobiotiques et la différenciation épithéliale, en s’intégrant à des voies incluant la signalisation PPAR et des circuits de maturation des hépatocytes. Dans des modèles murins, une activité altérée de Hnf4a est associée à une fonction hépatique perturbée, à une altération des programmes de barrière et d’absorption intestinale, ainsi qu’à une dérégulation métabolique plus large, ce qui en fait un nœud central pour l’étude de l’identité tissulaire et du contrôle de l’homéostasie.

HNF-4α Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hnf4a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HNF-4α Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hnf4a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hnf4a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HNF-4α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hnf4a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HNF-4α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HNF-4α dans les cellules tumorales présentant une expression de Hnf4a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.