Partículas Lentivirales de Activación (m) HNF-3β: sc-420890-LAC

Foxa2 codifica el factor nuclear hepático 3 beta (HNF-3β), un factor de transcripción de la familia forkhead box que actúa como factor pionero para abrir la cromatina y coordinar programas génicos específicos de linaje durante la formación del endodermo. En el desarrollo del ratón y en tejidos adultos, HNF-3β regula redes transcripcionales que controlan la diferenciación hepática y pancreática, el metabolismo de ácidos biliares y de la glucosa, y la homeostasis epitelial mediante interacciones con la señalización de receptores nucleares y otros reguladores transcripcionales. La actividad de Foxa2 integra señales de patrón del desarrollo y vías metabólicas, influyendo en decisiones de identidad celular y en respuestas al estrés. La desregulación de programas asociados a Foxa2 se ha vinculado con alteraciones en la regulación metabólica y fenotipos de remodelación tisular relevantes para modelos de diabetes y enfermedad hepática.

Las partículas de activación lentiviral HNF-3β (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Foxa2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HNF-3β (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Foxa2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HNF-3β. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Foxa2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.