Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420871-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HMG-1/HMGB1 Double-Nickase-Plasmid (m) und HMG-1/HMGB1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Hmgb1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HMG-1/HMGB1: sc-56698
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420871-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420871-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Hmgb1** kodiert das chromatinassoziierte Protein HMG-1/HMGB1, einen DNA-bindenden architektonischen Faktor, der Nukleoproteinkomplexe biegt und stabilisiert, um Transkription, Replikation, Rekombination und DNA-Reparatur zu modulieren. HMGB1 ist an der Chromatin-Remodellierung und an Schadensantwort-Signalwegen beteiligt, einschließlich der Koordination der Basenexzisionsreparatur sowie der Signalgebung bei der Reparatur von Doppelstrangbrüchen, und kann nach extrazellulärer Freisetzung entzündliche Signalwege beeinflussen. Eine fehlregulierte HMGB1-Aktivität wurde mit aberranten Zytokinantworten, Neuroinflammation und Tumorbiologie in Verbindung gebracht, weshalb es häufig Ziel von Studien zur angeborenen Immunität, zu Stressantworten und zur Genomstabilität ist. In Mausmodellen wird die Perturbation von **Hmgb1** genutzt, um Programme des Zelltods, sterile Entzündung und transkriptionelle Kontrolle in entwicklungs- und krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen.
HMG-1/HMGB1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Hmgb1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Hmgb1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Hmgb1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Hmgb1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.