Plásmido Doble Nickase (m) HMG-1/HMGB1: sc-420871-NIC

El gen murino **Hmgb1** codifica la proteína asociada a la cromatina **HMG-1/HMGB1**, un factor arquitectónico de unión al ADN que dobla y estabiliza complejos nucleoproteicos para modular la transcripción, la replicación, la recombinación y la reparación del ADN. **HMGB1** participa en la remodelación de la cromatina y en vías de respuesta al daño, incluida la coordinación de la reparación por escisión de bases y la señalización de reparación de roturas de doble cadena, y puede influir en la señalización inflamatoria cuando se libera al espacio extracelular. La actividad desregulada de HMGB1 se ha vinculado con respuestas aberrantes de citocinas, neuroinflamación y biología tumoral, por lo que es un objetivo frecuente en estudios de inmunidad innata, respuestas al estrés y mantenimiento del genoma. En modelos murinos, la perturbación de **Hmgb1** se utiliza para investigar programas de muerte celular, inflamación estéril y control transcripcional en contextos relevantes para el desarrollo y la enfermedad.

HMG-1/HMGB1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hmgb1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hmgb1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hmgb1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hmgb1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.