Plásmido Doble Nickase (h) Histone H1⁰: sc-403716-NIC

H1F0 codifica la variante de histona enlazadora independiente de la replicación, Histona H10, que se une al ADN de entrada/salida del nucleosoma para estabilizar la estructura de la cromatina de orden superior y ajustar la accesibilidad del genoma. Su acumulación se asocia comúnmente con la diferenciación celular y con un menor potencial proliferativo, lo que refleja sus funciones en la compactación de la cromatina, la regulación transcripcional y el mantenimiento del estado epigenético. Al modular el espaciado entre nucleosomas y las propiedades físicas de la cromatina, la Histona H10 influye en procesos como el momento de replicación del ADN, las respuestas al daño del ADN y los programas globales de expresión génica. Se han descrito alteraciones en la expresión de H1F0 y en la organización de la cromatina en diversos contextos de biología tumoral y especificación de linaje, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en estudios de desregulación epigenética.

Histone H10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus H1F0 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de H1F0. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de H1F0. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con H1F0 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.