Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420820-ACT

Hdac6 codifica a histona desacetilase 6 (HDAC6), uma desacetilase predominantemente citoplasmática que regula a homeostase proteica ao remover grupos acetil de substratos não histônicos essenciais, como a α-tubulina e a HSP90. Por meio do controle da dinâmica dos microtúbulos, da formação de aggresomas, da autofagia e da biologia dos grânulos de estresse, a HDAC6 integra a remodelação do citoesqueleto com a proteostase e as respostas celulares ao estresse. Vias dependentes de HDAC6 influenciam o transporte intracelular, a migração celular, a sinalização imune inata e as respostas à carga de proteínas mal dobradas. A atividade desregulada de HDAC6 tem sido associada à neurodegeneração, à inflamação e a processos relevantes para o câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos com modelos de doença.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hdac6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hdac6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hdac6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 6 (HDAC6). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hdac6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 6 (HDAC6) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 6 (HDAC6) em células tumorais com expressão de Hdac6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.