Plásmido CRISPR de Activación (m) Histone Deacetylase 1 (HDAC1): sc-436647-ACT

La histona desacetilasa 1 (HDAC1), codificada por el gen murino *Hdac1*, es una desacetilasa de lisina de clase I que elimina grupos acetilo de histonas y de sustratos no histónicos para regular la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales. HDAC1 actúa en complejos represores multiproteicos como Sin3, NuRD y CoREST para coordinar el silenciamiento epigenético, la progresión del ciclo celular, la replicación del ADN y las decisiones de diferenciación. A través de la comunicación cruzada con las respuestas al daño del ADN y las vías de estrés replicativo, HDAC1 contribuye a modelar la estabilidad del genoma y el control de los puntos de control. La actividad desregulada de HDAC1 y los estados alterados de acetilación de histonas se asocian ampliamente con redes transcripcionales aberrantes en modelos de cáncer, fenotipos del neurodesarrollo y señalización inflamatoria, lo que la convierte en un nodo clave para la investigación epigenética mecanística.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hdac1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hdac1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hdac1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone Deacetylase 1 (HDAC1). A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hdac1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone Deacetylase 1 (HDAC1) en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone Deacetylase 1 (HDAC1) en células tumorales con expresión de Hdac1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.