Histatin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416632-ACT

HTN1 codifica a histatina 1, um peptídeo rico em histidina, secretado pelas glândulas salivares, que contribui para a defesa inata e para a homeostase da mucosa na cavidade oral. A histatina 1 participa de processos antimicrobianos e ajuda a manter a barreira epitelial, influenciando a dinâmica de biofilmes e as interações hospedeiro–microrganismo na interface saliva–mucosa. Por meio de efeitos sobre o crescimento microbiano, a adesão e o tônus inflamatório local, o HTN1 é relevante para estudos sobre a regulação do microbioma oral e respostas ao estresse em células epiteliais e glandulares. A composição alterada de peptídeos salivares, incluindo membros da família das histatinas, é frequentemente investigada em condições que afetam a saúde oral e a função glandular, o que motiva pesquisas mecanísticas sobre a regulação de HTN1.

Histatin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HTN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histatin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HTN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HTN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histatin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HTN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histatin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histatin 1 em células tumorais com expressão de HTN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.