Plásmido Doble Nickase (h) Histamine H3 Receptor: sc-402473-NIC

HRH3 codifica el receptor de histamina H3, un GPCR acoplado a Gi/o enriquecido en el sistema nervioso central que funciona principalmente como autorreceptor y heterorreceptor presináptico para regular la liberación de neurotransmisores. Tras la unión de la histamina, la señalización de HRH3 inhibe la adenilil ciclasa para reducir la actividad de cAMP/PKA y modula la conductancia de canales iónicos y las vías MAPK/ERK aguas abajo, configurando la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica. Mediante el control del tono histaminérgico y la comunicación cruzada con circuitos dopaminérgicos, colinérgicos y noradrenérgicos, HRH3 contribuye a la regulación del ciclo sueño–vigilia, la cognición y la neurobiología relacionada con el apetito. La expresión o señalización alteradas de HRH3 se han investigado en el contexto de mecanismos de enfermedades neurológicas y neuropsiquiátricas, lo que respalda su utilidad como diana para la investigación a nivel de vías y circuitos.

Histamine H3 Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HRH3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HRH3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HRH3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HRH3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.