HIF PHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403671

概要

EGLN3は、低酸素誘導因子（HIF）のプロリン水酸化酵素3（PHD3）をコードしている。PHD3は酸素センサーとして働くジオキシゲナーゼであり、酸素および2-オキソグルタル酸依存的にHIF-αサブユニットを水酸化し、VHLによるユビキチン化とプロテアソーム分解を促進する。この正統的な低酸素応答経路を通じて、PHD3は酸素分圧の変動に応じて、血管新生、解糖系代謝、赤血球産生、細胞生存を制御する転写プログラムの調節に寄与する。さらにEGLN3の活性はミトコンドリア代謝や活性酸素種（ROS）シグナルとも交差しており、栄養状態と酸素利用可能性を適応的な遺伝子発現へと結び付ける。EGLN3/PHD3の発現や機能の破綻は、がんにおける低酸素応答の変調、虚血に関連した細胞ストレス、神経内分泌腫瘍などの文脈で関連が報告されており、低酸素研究における機序的ハブとしての有用性を裏付けている。

HIF PHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEGLN3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EGLN3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EGLN3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HIF PHD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HIF PHD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EGLN3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HIF PHD3の機能に不可欠なEGLN3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EGLN3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HIF PHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHIF PHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EGLN3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HIF PHD3 HDRプラスミド（h）および HIF PHD3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEGLN3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEGLN3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。