Plásmido Doble Nickase (h) HIF PHD2: sc-403334-NIC

EGLN1 codifica la prolil hidroxilasa 2 de HIF (PHD2), una dioxigenasa sensor de oxígeno que hidroxila las subunidades HIF-α en una reacción dependiente de hierro y 2-oxoglutarato. En condiciones de normoxia, esta modificación favorece la ubiquitinación mediada por VHL y la degradación proteasomal de HIF-α, limitando así los programas transcripcionales que controlan la angiogénesis, el metabolismo glucolítico, la eritropoyesis y la supervivencia celular. PHD2 integra señales derivadas de la disponibilidad de oxígeno, el metabolismo mitocondrial y las especies reactivas de oxígeno para ajustar la señalización inducible por hipoxia. La actividad desregulada de la vía EGLN1/HIF se ha vinculado a trastornos de la homeostasis del oxígeno y contribuye a fenotipos impulsados por hipoxia relevantes para la biología del cáncer, modelos de isquemia y microambientes inflamatorios.

HIF PHD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EGLN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EGLN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EGLN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EGLN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.