Hic-5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402786-NIC

TGFB1I1 kodiert Hic-5 (auch als ARA55 bekannt), ein Fokaladhäsions-Adapterprotein mit LIM-Domänen, das Signale aus der extrazellulären Matrix mit Zytoskelett-Remodellierung und transkriptionellen Antworten verknüpft. Hic-5 lokalisiert an Fokaladhäsionen und im Zellkern, wo es Signalkomplexe organisiert, die mit Integrin/FAK–SRC-Signalisierung, der Regulation von Rho-Familien-GTPasen und Mechanotransduktionswegen verbunden sind, welche Adhäsion, Migration und die Dynamik von Stressfasern koordinieren. Es ist durch TGF-β induzierbar und beteiligt sich an TGF-β-abhängigen Remodellierungsprogrammen, einschließlich kontextabhängiger Effekte auf die epithelial-mesenchymale Transition und die Aktivierung von Fibroblasten. Eine Fehlregulation der TGFB1I1/Hic-5-Aktivität wurde mit der Invasion und Metastasierung von Krebszellen, fibrotischen Signalnetzwerken und dem Umbau inflammatorischer Mikroumgebungen in Verbindung gebracht, wodurch es sich als nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung adhäsionsabhängiger transkriptioneller Kontrolle eignet.

Hic-5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TGFB1I1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TGFB1I1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TGFB1I1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TGFB1I1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.