Plásmido Doble Nickase (h) HEXA: sc-405523-NIC

HEXA codifica la subunidad α de la β-hexosaminidasa A, una glicosidasa lisosomal que se asocia con la subunidad β (HEXB) para catalizar la degradación paso a paso del gangliósido GM2 y de glicoconjugados relacionados. Esta actividad es fundamental para el catabolismo mediado por lisosomas y la homeostasis lipídica, y vincula la función de HEXA con el tráfico endolisosomal, la comunicación cruzada entre autofagia y lisosomas, y las respuestas de estrés celular desencadenadas por la acumulación de sustratos. Las variantes con pérdida de función en HEXA se asocian con la gangliosidosis GM2 (enfermedad de Tay–Sachs), un sistema modelo para investigar cómo la disfunción lisosomal altera la fisiología neuronal, la composición de membranas y la proteostasis. Como diana de investigación, HEXA respalda estudios sobre biología lisosomal, metabolismo de los glicoesfingolípidos y relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

HEXA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HEXA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HEXA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HEXA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HEXA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.