Plásmido CRISPR de Activación (h) HERG: sc-401143-ACT

KCNH2 codifica el canal humano de potasio HERG dependiente de voltaje (Kv11.1), un determinante central de la corriente rectificadora retardada rápida que da forma a la repolarización del potencial de acción cardíaco. La compuerta del canal y su expresión en la superficie celular se integran con los programas de excitabilidad de la membrana y están moduladas por vías de señalización que influyen en la fosforilación, el tráfico y la proteostasis en células excitables. Las alteraciones genéticas y funcionales de KCNH2 se asocian estrechamente con los síndromes de QT largo hereditarios y adquiridos, así como con la susceptibilidad a arritmias, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la electrofisiología, la regulación de los canales iónicos y los mecanismos de cardiotoxicidad. Más allá del contexto cardíaco, la actividad de HERG se utiliza para investigar estados celulares dependientes de canales iónicos en los que la conductancia de potasio afecta la proliferación, las respuestas al estrés y la señalización bioeléctrica.

HERG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HERG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HERG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HERG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HERG en células tumorales con expresión de KCNH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.