HERG CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401143-ACT

KCNH2 は、ヒトの HERG 電位依存性カリウムチャネル（Kv11.1）をコードしており、心筋活動電位の再分極を形成する速延遅整流カリウム電流（IKr）を規定する中核因子です。チャネルのゲーティングと細胞表面での発現は、膜興奮性プログラムと統合されており、興奮性細胞におけるリン酸化、トラフィッキング、プロテオスタシスに影響するシグナル伝達経路によって調節されます。KCNH2 の遺伝学的・機能的な攪乱は、先天性および後天性の QT 延長症候群や不整脈感受性と強く関連しているため、電気生理学、イオンチャネル制御、ならびに心毒性メカニズムの研究における重要な結節点となります。心臓以外の文脈においても、HERG 活性は、カリウム伝導が増殖、ストレス応答、バイオエレクトリックシグナリングに影響するような、イオンチャネル依存性の細胞状態を解析するために利用されています。

HERG CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KCNH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HERG CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KCNH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKCNH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HERGの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKCNH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHERG依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKCNH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHERG経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。