HEMK2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406503

Panoramica

N6AMT1 (nota anche come HEMK2) codifica una metiltransferasi che catalizza la metilazione delle proteine, contribuendo alla regolazione della fedeltà della traduzione e di processi associati al ribosoma. HEMK2 è stata collegata alla metilazione di componenti coinvolti nella terminazione della traduzione e del ribosoma, mettendola in relazione con le vie della proteostasi e con le risposte allo stress cellulare che dipendono da una sintesi proteica accurata. L’alterazione dell’attività di N6AMT1/HEMK2 è stata studiata in contesti che includono la stabilità del genoma, la segnalazione dello stress mitocondriale e ossidativo e la deregolazione del controllo della crescita, rendendola rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro e in altri disturbi caratterizzati da un mantenimento del proteoma compromesso. La sua funzione enzimatica e l’ampia integrazione nei processi cellulari ne supportano l’utilizzo come nodo per investigare le reti di modificazioni post-traduzionali e i conseguenti adattamenti trascrizionali e metabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HEMK2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene N6AMT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del N6AMT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto N6AMT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HEMK2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di N6AMT1 per lo studio della segnalazione di HEMK2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni N6AMT1 critici per la funzione di HEMK2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di N6AMT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HEMK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HEMK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus N6AMT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HEMK2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HEMK2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia N6AMT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio N6AMT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.