Plasmide CRISPR/Cas9 KO HEMK2 (h): sc-406503

Présentation

N6AMT1 (également connu sous le nom de HEMK2) code une méthyltransférase qui catalyse la méthylation des protéines, contribuant à la régulation de la fidélité de la traduction et de processus associés au ribosome. HEMK2 a été associé à la méthylation de composants impliqués dans la terminaison de la traduction ainsi que d’éléments ribosomiques, ce qui le relie aux voies de protéostasie et aux réponses au stress cellulaire dépendant d’une synthèse protéique précise. Les altérations de l’activité de N6AMT1/HEMK2 ont été étudiées dans des contextes impliquant la stabilité du génome, la signalisation du stress mitochondrial et oxydatif, ainsi qu’un contrôle de la croissance déréglé, ce qui en fait une cible pertinente pour des travaux mécanistiques en biologie du cancer et dans d’autres troubles caractérisés par une maintenance perturbée du protéome. Sa fonction enzymatique et son intégration à de nombreux processus cellulaires soutiennent son utilisation comme nœud d’investigation des réseaux de modifications post-traductionnelles et des adaptations transcriptionnelles et métaboliques en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HEMK2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène N6AMT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du N6AMT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert N6AMT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HEMK2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en N6AMT1 pour l'étude de la signalisation de HEMK2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de N6AMT1 essentiels à la fonction de HEMK2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de N6AMT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HEMK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HEMK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus N6AMT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HEMK2 plasmide HDR (h) et le HEMK2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie N6AMT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles N6AMT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.