Heme Oxygenase 1/HMOX1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400157-LAC

HMOX1 codifica l’eme ossigenasi 1 (HO-1), un enzima inducibile e sensibile allo stress che catalizza la degradazione dell’eme in biliverdina (successivamente convertita in bilirubina), ferro ferroso e monossido di carbonio. Regolando l’eme intracellulare e l’equilibrio redox, HO-1 influenza le risposte allo stress ossidativo, l’omeostasi mitocondriale, la gestione del ferro e la segnalazione infiammatoria, ed è comunemente indotta a valle di NRF2/KEAP1 e di altre vie attivate dallo stress. Un’alterata espressione di HMOX1 è spesso studiata in contesti di disfunzione vascolare, neuroinfiammazione, stress metabolico e rimodellamento del microambiente tumorale, dove i suoi prodotti enzimatici possono modulare la segnalazione delle citochine, l’autofagia e i programmi di sopravvivenza cellulare. Queste caratteristiche rendono HMOX1 un nodo centrale per indagare le reti trascrizionali citoprotettive e i meccanismi di danno guidati da eme/ferro in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale Heme Oxygenase 1/HMOX1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HMOX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Heme Oxygenase 1/HMOX1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HMOX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Heme Oxygenase 1/HMOX1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HMOX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.