HB9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402097

Panoramica

MNX1 codifica il fattore di trascrizione homeobox HB9, un regolatore legante il DNA essenziale per il patterning embrionale e la specificazione di linea, in particolare nei motoneuroni del midollo spinale in sviluppo e nei progenitori pancreatici. HB9 controlla programmi trascrizionali che governano la differenziazione neuronale, la guida assonale e la restrizione del destino cellulare, coordinando reti a valle di regolatori dello sviluppo. Un’espressione deregolata di MNX1 o un’attività aberrante di HB9 è stata associata a stati di differenziazione alterati e a programmi trascrizionali oncogenici in contesti di tumori ematologici e solidi. In quanto fattore di trascrizione dello sviluppo, MNX1 è spesso studiato per definire circuiti di regolazione genica, transizioni dello stato della cromatina ed effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HB9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MNX1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MNX1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MNX1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HB9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MNX1 per lo studio della segnalazione di HB9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MNX1 critici per la funzione di HB9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MNX1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HB9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HB9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MNX1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HB9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HB9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MNX1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MNX1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.