Plásmido CRISPR de Activación (h) Haptoglobin: sc-401468-ACT

HP codifica la haptoglobina, una glucoproteína secretada de fase aguda que se une a la hemoglobina libre con alta afinidad para prevenir el daño oxidativo impulsado por el hemo y conservar el hierro tras la hemólisis intravascular. El complejo haptoglobina–hemoglobina se elimina principalmente a través de macrófagos CD163 positivos, lo que vincula a HP con la regulación de la inmunidad innata, la señalización inflamatoria y la homeostasis redox. Como parte de la respuesta de fase aguda, la expresión de HP está modulada por vías mediadas por citocinas, incluidas IL-6/STAT3 y programas transcripcionales relacionados que coordinan la inflamación sistémica. Se han asociado cambios en la abundancia de HP y en los patrones de sus glicoformas con estados hemolíticos, trastornos inflamatorios y fenotipos de enfermedad cardiometabólica, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de inmunometabolismo y estrés oxidativo.

Haptoglobin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Haptoglobin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Haptoglobin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Haptoglobin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Haptoglobin en células tumorales con expresión de HP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.