HAI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423129

概要

Spint2はセリンプロテアーゼ阻害因子HAI-2をコードしており、HAI-2は膜結合性のKunitz型制御因子として、マトリプターゼやヘプシンなどのII型膜貫通セリンプロテアーゼを阻害することで、細胞周囲で起こるタンパク質分解（周細胞性プロテオリシス）を抑制します。プロテアーゼによる増殖因子の活性化や細胞外マトリックスのターンオーバー調節を制限することで、HAI-2は上皮バリアの完全性、組織リモデリング、ならびに細胞極性のプログラムに影響を与えます。マウス系では、SPINT2/HAI-2活性の変化が、上皮機能障害や異常な間質—上皮シグナル伝達に結びつくプロテアーゼ—阻害因子バランスの破綻を研究するために用いられています。これらの過程は、炎症や腫瘍生物学のモデル化に関連する、接着・遊走・プロテアーゼ依存的シグナル伝達カスケードを制御する経路と交差します。

HAI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSpint2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Spint2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Spint2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HAI-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HAI-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Spint2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HAI-2の機能に不可欠なSpint2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Spint2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HAI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHAI-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Spint2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HAI-2 HDRプラスミド（m）および HAI-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSpint2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSpint2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。