Plasmide CRISPR/Cas9 KO H2BFWT (h): sc-407111

Présentation

H2BFWT code un membre humain de la famille des histones H2B qui participe à l’organisation des nucléosomes et à l’architecture de la chromatine de haut niveau, influençant ainsi l’accessibilité du génome à la transcription, à la réplication et à la réparation de l’ADN. En tant que composant central de la chromatine, H2BFWT contribue à coordonner la régulation épigénétique et les processus dépendants de la chromatine, tels que la progression du cycle cellulaire et le maintien de la stabilité génomique. Des altérations du dosage des histones ou de la composition de la chromatine sont fréquemment associées à des programmes d’expression génique dérégulés et peuvent moduler des voies impliquées dans l’oncogenèse et des anomalies du développement. Par conséquent, H2BFWT est pertinent pour les études sur la dynamique de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et les réponses aux dommages de l’ADN dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO H2BFWT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène H2BFWT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du H2BFWT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert H2BFWT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine H2BFWT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en H2BFWT pour l'étude de la signalisation de H2BFWT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de H2BFWT essentiels à la fonction de H2BFWT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de H2BFWT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le H2BFWT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le H2BFWT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus H2BFWT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le H2BFWT plasmide HDR (h) et le H2BFWT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie H2BFWT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles H2BFWT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.