Plasmide Double Nickase (m) H2-Dd: sc-420759-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) H2-Dd correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide H2-Dd Double Nickase (m) et le plasmide H2-Dd Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant H2-D1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: H2-Dd Antibody (34-5-8S): sc-52542
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) H2-Dd | sc-420759-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) H2-Dd | sc-420759-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2-D1 code pour la chaîne lourde H2-Dd du CMH de classe I chez la souris, un composant essentiel de la présentation antigénique qui se lie à la β2‑microglobuline et présente des peptides endogènes aux lymphocytes T CD8+. En modulant le répertoire peptidique et l’engagement du récepteur des lymphocytes T, H2-Dd régule la surveillance immunitaire, l’activation des effecteurs cytotoxiques et la tolérance périphérique. La fonction de H2-Dd s’articule avec les voies de traitement des antigènes, notamment la dégradation protéasomale, le transport des peptides dépendant de TAP et le chargement dans le RE médié par les composants du complexe de chargement des peptides. La variation ou la modulation expérimentale de H2-D1 est largement utilisée pour étudier l’alloréactivité, l’immunobiologie de la transplantation, l’immunogénicité tumorale et les réponses de l’hôte à l’infection virale dans des modèles murins.
H2-Dd Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus H2-D1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de H2-D1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de H2-D1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de H2-D1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.