Plasmide CRISPR d'Activation (h) GTPBP10: sc-413794-ACT

Le gène humain **GTPBP10** code une protéine mitochondriale liant le GTP, impliquée dans les étapes tardives de la maturation du mitoribosome, en soutenant l’assemblage de la grande sous-unité ribosomique et une traduction mitochondriale efficace. En régulant la production de composants de la phosphorylation oxydative codés par l’ADN mitochondrial, GTPBP10 contribue à l’intégrité de la chaîne respiratoire, à la génération d’ATP et à la protéostasie mitochondriale. Les perturbations de la biogenèse du mitoribosome et de la traduction mitochondriale sont largement associées aux réponses au stress bioénergétique, à des déséquilibres du statut rédox et à des voies de dysfonctionnement mitochondrial fréquemment étudiées dans des modèles de maladies neuromusculaires et métaboliques, ainsi que dans l’adaptation des cellules cancéreuses. Ainsi, GTPBP10 constitue un point d’entrée utile pour étudier l’assemblage du ribosome mitochondrial, la régulation de l’OXPHOS et la signalisation de stress en aval.

GTPBP10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GTPBP10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GTPBP10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GTPBP10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GTPBP10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GTPBP10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GTPBP10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GTPBP10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GTPBP10 dans les cellules tumorales présentant une expression de GTPBP10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.