GRP94 Lentiviral Activation Particles (m): sc-423491-LAC

Das murine Gen Hsp90b1 kodiert GRP94 (gp96), ein Chaperon der HSP90-Familie im endoplasmatischen Retikulum (ER), das die Proteostase unterstützt, indem es die Faltung und Qualitätskontrolle sekretierter und membranständiger Proteine erleichtert, darunter Integrine und mehrere Immunrezeptoren. GRP94 ist an der Antwort auf fehlgefaltete Proteine (UPR) und am ER-assoziierten Abbau (ERAD) beteiligt und verknüpft damit ER-Stress-Signalwege mit der Calcium-Homöostase und der Funktion des sekretorischen Weges. Da GRP94 die Antigenpräsentation, die angeborene Immun-Signalübertragung und die Reifung von Zelloberflächenrezeptoren beeinflusst, wird eine veränderte Hsp90b1-Aktivität häufig in Zusammenhängen von Entzündung, Immunfehlregulation und stressadaptiven Programmen untersucht, die für die Tumorbiologie relevant sind.

GRP94 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Hsp90b1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GRP94 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Hsp90b1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GRP94-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Hsp90b1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.