GRK 4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402816

Descripción general

GRK4 codifica la quinasa 4 de receptores acoplados a proteína G (GRK4), una quinasa de serina/treonina que fosforila los GPCR activados para favorecer el reclutamiento de β-arrestina, la desensibilización del receptor y su tráfico intracelular. La actividad de GRK4 influye en la dinámica de señalización de vías vinculadas a cAMP/PKA y en las salidas posteriores de MAPK, al modular la intensidad y la duración de las respuestas mediadas por receptores. En contextos relevantes para el riñón y el sistema vascular, se ha estudiado GRK4 por sus efectos sobre la regulación de receptores dopaminérgicos y el manejo del sodio, lo que lo conecta con fenotipos de regulación de la presión arterial. La expresión alterada de GRK4 o variantes funcionales se han asociado con áreas de investigación cardiovascular y renal en las que se altera la homeostasis de la señalización de GPCR.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GRK 4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRK4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRK4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRK4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GRK 4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRK4 para la investigación de la señalización de GRK 4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRK4 críticos para la función de GRK 4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRK4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GRK 4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GRK 4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRK4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GRK 4 (h) y el plásmido HDR GRK 4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRK4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRK4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.