GPR91 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403394-ACT

SUCNR1 kodiert den menschlichen Succinat-Rezeptor GPR91, einen metabolitensensitiven GPCR, der erhöhte extrazelluläre Succinatspiegel mit nachgeschalteten Signalprogrammen verknüpft, darunter MAPK/ERK- sowie calciumabhängige Signalwege. Die Aktivierung von GPR91 integriert den zellulären Stoffwechselzustand mit Entzündungs- und Stressantworten, beeinflusst das Verhalten von Gefäß- und Immunzellen und moduliert die Zytokin- und Chemokinsignalisierung. Eine fehlregulierte Succinat–SUCNR1-Signalgebung wurde mit Zuständen in Verbindung gebracht, die mit Hypoxie und mitochondrialer Dysfunktion assoziiert sind, darunter kardiometabolische und renale Pathophysiologie sowie Gewebeumbau und abnorme angiogene Antworten. Daher stellt SUCNR1/GPR91 einen nützlichen Knotenpunkt dar, um Immunometabolismus, GPCR-vermittelte Signaltransduktion und das Erfassen von Mikroumgebungsreizen in humanen Modellsystemen zu untersuchen.

GPR91 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SUCNR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR91 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SUCNR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SUCNR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR91-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SUCNR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR91-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR91-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SUCNR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.