GPR43 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401858-LAC-2

FFAR2 (GPR43) umano codifica un recettore accoppiato a proteine G sensibile agli acidi grassi a catena corta, attivato da acetato e propionato, che regola la segnalazione intracellulare tramite vie collegate a Gαi/o e Gαq, includendo la modulazione del cAMP, i flussi di calcio e le risposte MAPK a valle. È espresso in modo marcato in contesti immunitari ed epiteliali, dove modella la chemiotassi, i programmi citochinici e i processi infiammatori associati alla barriera, collegando i metaboliti della fermentazione microbica alla regolazione immunometabolica dell’ospite. Una segnalazione di FFAR2 deregolata è stata implicata nella biologia di malattie infiammatorie e metaboliche, includendo un’alterata attivazione dell’immunità innata e l’omeostasi metabolica associata al tessuto adiposo. L’editing genetico di FFAR2 supporta studi meccanicistici sulla farmacologia ligando–recettore, sul bias di segnalazione dei GPCR, sul crosstalk metabolico microbioma–ospite e sulla genomica funzionale in modelli cellulari pertinenti.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR43 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FFAR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR43 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FFAR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPR43. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FFAR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.