GPR34 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423884-ACT

O gene **Gpr34** de camundongo codifica o **GPR34**, um receptor acoplado à proteína G (GPCR) da classe A, do tipo rodopsina, enriquecido em linhagens imunes e mieloides, incluindo a micróglia. A sinalização do GPR34 tem sido associada à modulação da quimiotaxia, do tônus inflamatório e de vias de GPCR dependentes de AMPc que moldam a ativação da imunidade inata e o comportamento de macrófagos residentes em tecidos. No sistema nervoso central, o GPR34 contribui para a homeostase microglial e para respostas a sinais associados a lesão, interagindo com processos de neuroinflamação. Alterações na sinalização de GPCR via GPR34 têm sido investigadas em contextos de doenças inflamatórias e na biologia mieloide associada a tumores, o que sustenta seu uso como ferramenta para sondar mecanismos de regulação imune.

GPR34 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gpr34 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR34 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gpr34 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gpr34, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR34. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gpr34 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR34 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR34 em células tumorais com expressão de Gpr34 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.