Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR30: sc-402502-ACT

GPER1 codifica GPR30 (GPER), un receptor de estrógeno asociado a la membrana que media la señalización estrogénica rápida y no genómica, e integra esta actividad con programas transcripcionales canónicos sensibles a estrógenos. La activación de GPR30 puede activar las vías de cAMP/PKA, la transactivación de EGFR, MAPK/ERK, PI3K/AKT y los flujos intracelulares de Ca²⁺, influyendo en la proliferación, la migración, el metabolismo y la señalización inflamatoria de manera dependiente del tipo celular. La desregulación de la señalización de GPER1/GPR30 se ha implicado en cánceres hormonodependientes, disfunción cardiovascular y metabólica y procesos neuroinflamatorios, lo que lo convierte en un nodo útil para analizar la interconexión (crosstalk) de vías impulsadas por estrógenos. Como receptor de señalización asociado a biomarcadores, GPR30 se estudia con frecuencia por su impacto en las transiciones de estado celular, el tráfico de receptores y las redes génicas de respuesta al estrés.

GPR30 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPER1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR30 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPER1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPER1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR30. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPER1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR30 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR30 en células tumorales con expresión de GPER1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.