GPR171 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-412047-LAC

GPR171 codifica um receptor acoplado à proteína G da classe A (semelhante à rodopsina) órfão, que participa da sinalização neuromodulatória e da regulação de vias intracelulares de segundos mensageiros, incluindo cascatas de cAMP e MAPK mediadas por GPCR. No sistema nervoso central, o GPR171 tem sido associado ao controle do comportamento alimentar, dos circuitos de recompensa e de respostas relacionadas ao estresse, em consonância com papéis na comunicação sináptica e na excitabilidade de redes neuronais. Estudos transcriptômicos e funcionais associaram alterações na atividade de GPR171 a fenótipos neuropsiquiátricos e metabólicos, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico para dissecar a sinalização em nível de circuitos. Como receptor de membrana, ele fornece um modelo tratável para estudar o tráfego de receptores, a descoberta de ligantes e o acoplamento a efetores a jusante em sistemas celulares humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR171 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de GPR171 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR171 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição GPR171, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR171. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo GPR171 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.