GPR171 Lentiviral Activation Particles (h): sc-412047-LAC

GPR171 kodiert einen verwaisten G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der Klasse A (rhodopsinähnlich), der an neuromodulatorischer Signalübertragung und der Regulation intrazellulärer Second‑Messenger‑Signalwege beteiligt ist, darunter GPCR‑vermittelte cAMP‑ und MAPK‑Kaskaden. Im zentralen Nervensystem wird GPR171 mit der Kontrolle des Fressverhaltens, der Belohnungsschaltkreise und stressassoziierten Reaktionen in Verbindung gebracht, was zu Rollen in synaptischer Kommunikation und der Erregbarkeit neuronaler Netzwerke passt. Transkriptomische und funktionelle Studien haben eine veränderte GPR171‑Aktivität mit neuropsychiatrischen und metabolischen Phänotypen assoziiert und stützen damit seinen Nutzen als mechanistischen Knotenpunkt zur Analyse schaltkreisbasierter Signalgebung. Als Membranrezeptor bietet es ein gut handhabbares Modell zur Untersuchung von Rezeptor‑Trafficking, Ligandenfindung und der Kopplung nachgeschalteter Effektoren in humanen Zellsystemen.

GPR171 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GPR171-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR171 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GPR171-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR171-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GPR171-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.