GPR107 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412891-ACT

GPR107 (G‑Protein-gekoppelter Rezeptor 107) ist ein konserviertes, multipassiges Membranprotein, das überwiegend im trans-Golgi-Netzwerk lokalisiert ist und an intrazellulärem Membrantransport sowie der Proteinsortierung beteiligt ist. Es wird mit der Regulation der Dynamik des sekretorischen Weges und mit retrograden Transportprozessen in Verbindung gebracht, die das Recycling von Rezeptoren und Fracht zwischen endosomalen und Golgi-Kompartimenten beeinflussen. Über diese Funktionen kann GPR107 zelluläre, vom vesikelvermittelten Transport abhängige Antworten modulieren, einschließlich der Nährstoffverarbeitung und der Verfügbarkeit von Oberflächenrezeptoren. Eine veränderte GPR107-Expression wurde in mehreren krebsbezogenen transkriptomischen Datensätzen berichtet, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel zur Untersuchung von trafficking-abhängigen Phänotypen in krankheitsrelevanten Modellen stützt.

GPR107 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPR107-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR107 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPR107-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPR107-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR107-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPR107-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR107-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR107-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPR107-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.