GPR105 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-405954-LAC

P2RY14 (GPR105) codifica um GPCR purinérgico acoplado à proteína Gi que detecta UDP-açúcares extracelulares, como UDP-glicose e UDP-galactose, conectando a liberação de açúcares nucleotídicos à sinalização imune e epitelial. A ativação do receptor geralmente suprime o cAMP e pode modular programas de MAPK/ERK e quimiotaxia, influenciando o recrutamento de leucócitos, as respostas de citocinas e a inflamação associada à barreira. A atividade do GPR105 cruza-se com a sinalização purinérgica de perigo em contextos de estresse tecidual e exposição microbiana, tornando-o relevante para estudos de redes inflamatórias e da comunicação no microambiente tumor–imune. Alterações na expressão de P2RY14 e no acoplamento de suas vias têm sido associadas a respostas mieloides e epiteliais desreguladas, sustentando sua investigação em modelos de imunologia, fibrose e biologia do câncer.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR105 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de P2RY14 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR105 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição P2RY14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR105. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo P2RY14 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.