Plásmido Doble Nickase (h) GPD2: sc-402698-NIC

GPD2 codifica la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa mitocondrial, un componente flavoproteico clave de la lanzadera del glicerofosfato, que transfiere equivalentes reductores citosólicos a las mitocondrias acoplando la oxidación de glicerol-3-fosfato a la reducción de ubiquinona. Esta actividad conecta la glucólisis con la fosforilación oxidativa, influye en el equilibrio redox celular y sostiene el metabolismo de lípidos y glicerolípidos mediante el control de los reservorios de glicerol-3-fosfato. Al modular el transporte electrónico mitocondrial y la generación de especies reactivas de oxígeno, GPD2 contribuye a la flexibilidad metabólica en contextos de estrés nutricional e hipoxia. La desregulación de la función de GPD2 se ha investigado en relación con fenotipos de enfermedades metabólicas y con estados bioenergéticos alterados observados en diversos modelos de investigación oncológica y del ámbito endocrino.

GPD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPD2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.