GPD1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403706

Descripción general

El GPD1 humano codifica la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa 1 citosólica, una enzima dependiente de NADH que interconvierte la dihidroxiacetona fosfato y el glicerol-3-fosfato, conectando la glucólisis con la síntesis de glicerolípidos y el equilibrio redox. A través de su papel en la lanzadera del glicerol fosfato y en la generación de precursores de triglicéridos/fosfolípidos, GPD1 influye en la homeostasis citosólica de NAD+/NADH, el metabolismo energético y los programas de almacenamiento de lípidos. La actividad alterada de GPD1 se ha relacionado con la remodelación metabólica en hígado y tejido adiposo, y se estudia en el contexto de la dislipidemia, de vías asociadas a la resistencia a la insulina y, de forma más amplia, del acoplamiento redox mitocondrial–citosólico. Estas funciones hacen de GPD1 un nodo útil para investigar cómo se reparte el flujo de carbono entre la glucólisis y la biosíntesis de lípidos bajo estrés nutricional o señalización hormonal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPD1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPD1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPD1 para la investigación de la señalización de GPD1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GPD1 críticos para la función de GPD1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPD1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPD1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPD1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPD1 (h) y el plásmido HDR GPD1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.