GPD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403706

Panoramica

Il gene umano **GPD1** codifica la glicerolo-3-fosfato deidrogenasi 1 citosolica, un enzima NADH-dipendente che interconverte il diidrossiacetone fosfato e il glicerolo-3-fosfato, collegando la glicolisi alla sintesi dei glicerolipidi e al bilanciamento redox. Attraverso il suo ruolo nella navetta del glicerolo fosfato e nella generazione di precursori di trigliceridi/fosfolipidi, GPD1 influenza l’omeostasi citosolica NAD+/NADH, il metabolismo energetico e i programmi di accumulo lipidico. Un’alterata attività di GPD1 è stata collegata al rimodellamento metabolico nel fegato e nel tessuto adiposo ed è studiata nel contesto della dislipidemia, dei percorsi associati alla resistenza all’insulina e, più in generale, dell’accoppiamento redox mitocondrio–citosol. Queste funzioni rendono GPD1 un nodo utile per indagare la ripartizione del flusso di carbonio tra glicolisi e biosintesi lipidica in condizioni di stress nutrizionale o di segnalazione ormonale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPD1 per lo studio della segnalazione di GPD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPD1 critici per la funzione di GPD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.