Plásmido Doble Nickase (h) gp91phox/CYBB/NOX2: sc-400222-NIC

CYBB codifica gp91phox (NOX2), la subunidad catalítica de membrana del complejo NADPH oxidasa de los fagocitos, responsable de generar especies reactivas de oxígeno durante el estallido oxidativo. La actividad de NOX2 respalda la defensa inmunitaria innata al impulsar la producción de superóxido en neutrófilos y macrófagos, e influye en vías de señalización posteriores sensibles al estado redox, incluidas MAPK y NF-κB, que modulan las respuestas inflamatorias. La alteración de la función de CYBB se asocia con una menor capacidad de eliminación microbiana y con cambios en la homeostasis inflamatoria, lo que la convierte en un nodo clave en los estudios de biología de los fagocitos. CYBB también se utiliza como locus modelo para investigar el ensamblaje y la regulación de complejos oxidasa multisubunidad y la señalización de ROS compartimentalizada.

gp91phox/CYBB/NOX2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYBB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYBB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYBB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYBB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.