GnRHR Lentiviral Activation Particles (h): sc-401783-LAC

Das humane **GNRHR**-Gen kodiert den Gonadotropin-Releasing-Hormon-Rezeptor (GnRHR), einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor der Klasse A, der in hypophysären Gonadotrophen hypothalamische GnRH-Signale weiterleitet und dadurch die Synthese und Sekretion von luteinisierendem Hormon (LH) und follikelstimulierendem Hormon (FSH) reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt GnRHR überwiegend an Gq/11 und aktiviert PLCβ, wodurch IP3 und DAG gebildet werden, der intrazelluläre Ca2+-Spiegel ansteigt und PKC-abhängige Signalwege mit nachgeschalteter Modulation des MAPK/ERK-Signalwegs angestoßen werden. Diese Signalachse koordiniert das Timing der reproduktiven Endokrinologie, Rückkopplungsschleifen der Steroidogenese und die Gonadenentwicklung über streng kontrollierte transkriptionelle Programme. Eine fehlregulierte GNRHR-Expression oder -Signalübertragung wurde mit reproduktionsendokrinen Störungen in Verbindung gebracht, darunter hypogonadotroper Hypogonadismus und veränderte Pubertätszeitpunkte, und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung der Regulation hypophysärer Hormone.

GnRHR Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GNRHR-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GnRHR Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GNRHR-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GnRHR-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GNRHR-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.