GlyT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403077

Übersicht

SLC6A5 kodiert den präsynaptischen Glycintransporter GlyT2 (SLC6-Familie), einen Na\+/Cl\--abhängigen Transporter, der die hochaffine Wiederaufnahme von Glycin in inhibitorische glyzinergische Neuronen vermittelt. Indem GlyT2 das zytosolische Glycin für die vesikuläre Beladung wieder auffüllt, unterstützt er eine schnelle synaptische Hemmung im Rückenmark und Hirnstamm und trägt dazu bei, die Erregbarkeit neuronaler Netzwerke zu formen. Dieser Transporter ist mit Prozessen des Neurotransmitter-Recyclings und der Chlorid-Homöostase verknüpft, die den inhibitorischen Tonus und den Output sensomotorischer Schaltkreise regulieren. Eine Störung oder Fehlregulation von SLC6A5 wurde mit beeinträchtigter glyzinerger Signalübertragung und neurophysiologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die hereditäre Hyperekplexie und verwandte Funktionsstörungen inhibitorischer Synapsen relevant sind.

Das GlyT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC6A5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC6A5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC6A5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GlyT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC6A5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GlyT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC6A5-Exone abzielen, die für die GlyT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC6A5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GlyT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GlyT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC6A5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GlyT2 HDR-Plasmid (h) und GlyT2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC6A5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC6A5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.