Plasmide Double Nickase (h) GlyR β: sc-403759-NIC

GLRB code la sous-unité bêta du récepteur à la glycine (GlyR β), un composant essentiel des canaux chlorure pentamériques activés par des ligands, qui assurent une neurotransmission inhibitrice rapide dans la moelle épinière et le tronc cérébral. GlyR β contribue à l’assemblage du récepteur, à sa localisation synaptique et au contrôle de l’ouverture du canal (gating), reliant la signalisation glycinergique à l’hyperpolarisation membranaire et à la régulation de l’excitabilité neuronale. Grâce à sa coordination avec des protéines d’échafaudage telles que la géphyrine, GLRB soutient l’organisation des synapses inhibitrices et l’homéostasie du chlorure. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de GLRB sont associées à une altération de la signalisation inhibitrice et à des phénotypes neurologiques pertinents pour la maladie du sursaut (startle disease) et d’autres troubles du contrôle moteur.

GlyR β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLRB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLRB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLRB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLRB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.