Plasmide Double Nickase (h) glycogen synthase 2: sc-402704-NIC

GYS2 code la glycogène synthase 2 humaine, l’isoforme prédominante responsable de l’allongement des chaînes de glycogène dans les hépatocytes en transférant du glucose à partir de l’UDP-glucose vers des amorces de glycogène préexistantes. Son activité intègre les signaux de l’insuline et des nutriments via une régulation dépendante de la phosphorylation, coordonnant le stockage hépatique du glycogène avec la disponibilité systémique en glucose. GYS2 intervient dans les voies du métabolisme des glucides qui équilibrent la glycogénogenèse et la glycogénolyse, et est étroitement liée à l’homéostasie du glucose au cours des cycles d’alimentation et de jeûne. La dérégulation de la synthèse du glycogène dépendante de GYS2 est pertinente pour des phénotypes métaboliques impliquant une accumulation ou une déplétion anormale du glycogène hépatique, et est fréquemment étudiée dans le contexte de la résistance à l’insuline et, plus largement, des mécanismes des maladies métaboliques.

glycogen synthase 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GYS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GYS2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GYS2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GYS2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.