Glutathione Peroxidase 8/GPX8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404847-ACT

A GPX8 (Glutationa Peroxidase 8) humana é uma glutationa peroxidase associada ao retículo endoplasmático que contribui para a homeostase redox ao reduzir peróxidos e limitar o dano oxidativo a proteínas na via secretória. Ao moldar as condições de dobramento oxidativo no RE e o fluxo de peróxidos, a GPX8 influencia a proteostase, a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e vias mais amplas de estresse oxidativo celular. Alterações na expressão ou atividade da GPX8 têm sido associadas na literatura a desequilíbrio redox e sinalização inflamatória desregulada, com relevância relatada em contextos como biologia tumoral e estresse metabólico. Como resultado, a GPX8 é frequentemente estudada por seu papel na sinalização dependente de EROs (ROS), na adaptação ao estresse do RE e em transições de estado celular controladas por redox.

Glutathione Peroxidase 8/GPX8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPX8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 8/GPX8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPX8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPX8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 8/GPX8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPX8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 8/GPX8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 8/GPX8 em células tumorais com expressão de GPX8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.