Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double Nickase Plasmid (m): sc-436949-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double-Nickase-Plasmid (m) und Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Gpx4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-166570
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-436949-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Gpx4** kodiert die Glutathionperoxidase 4 (GPX4), ein Selenoenzym, das unter Verwendung von Glutathion Phospholipid-Hydroperoxide in zellulären Membranen reduziert und so die Membranintegrität sowie die Redoxhomöostase aufrechterhält. GPX4 ist ein zentraler Inhibitor der Ferroptose, indem es die eisengetriebene Lipidperoxidation begrenzt, und ist mit antioxidativen Netzwerken wie dem Glutathionstoffwechsel und der durch NRF2 regulierten oxidativen Stressantwort verknüpft. Eine Beeinträchtigung der GPX4-Funktion verändert mitochondriale und lipidspezifische Signalwege, beeinflusst entzündliche Stressreaktionen und wirkt sich auf das Zellüberleben unter oxidativem und metabolischem Stress aus. Eine dysregulierte GPX4-Aktivität wurde in experimentellen Modellen der Neurodegeneration, der Ischämie-Reperfusionsschädigung und der Tumorbiologie mit der Kontrolle der Lipidperoxidation und der Empfindlichkeit gegenüber Ferroptose in Verbindung gebracht.
Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Gpx4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Gpx4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Gpx4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Gpx4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.