Plásmido CRISPR de Activación (h) Glutathione Peroxidase 3/GPX3: sc-402413-ACT

El GPX3 humano codifica la glutatión peroxidasa 3, una selenoproteína secretada que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos lipídicos utilizando glutatión, limitando así el daño oxidativo extracelular. GPX3 contribuye a la homeostasis redox, a la modulación de la señalización inflamatoria y a la protección de componentes de la membrana y de la matriz frente a las especies reactivas de oxígeno, conectándose con redes de respuesta al estrés oxidativo y con el metabolismo del glutatión. Se ha informado de una expresión alterada de GPX3 en contextos asociados a un equilibrio redox desregulado, incluida la biología del cáncer, el estrés metabólico y los procesos de remodelación vascular o tisular, donde la capacidad antioxidante extracelular puede influir en la señalización y en las interacciones célula–microambiente. Estas características hacen de GPX3 una diana útil para estudiar vías reguladas por el estado redox, fenotipos de estrés oxidativo y la función de antioxidantes secretados en modelos celulares humanos.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glutathione Peroxidase 3/GPX3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glutathione Peroxidase 3/GPX3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glutathione Peroxidase 3/GPX3 en células tumorales con expresión de GPX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.