GluR-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403848-ACT

GRIA3 codifica a subunidade GluR-3 do receptor de glutamato do tipo AMPA, um determinante central da transmissão sináptica excitatória rápida no sistema nervoso central. Como canal iônico dependente de ligante, a GluR-3 contribui para o fluxo de Na⁺/Ca²⁺ dependente da atividade, moldando a despolarização neuronal, a plasticidade sináptica e a excitabilidade dos circuitos. A função de GRIA3 se cruza com programas de sinalização glutamatérgica que regulam a potenciação de longa duração/depressão de longa duração (LTP/LTD) e respostas transcricionais a jusante dependentes de cálcio. Alterações na composição ou no tráfego de receptores AMPA têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, sustentando a investigação de GRIA3 na diferenciação neuronal, na atividade de redes e em estados de sinalização relevantes para doenças.

GluR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRIA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GluR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRIA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRIA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GluR-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRIA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GluR-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GluR-3 em células tumorais com expressão de GRIA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.