Glucosidase IIβ Double Nickase Plasmid (h): sc-404394-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Glucosidase IIβ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Glucosidase IIβ Double-Nickase-Plasmid (h) und Glucosidase IIβ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PRKCSH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Glucosidase IIβ: sc-374457
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Glucosidase IIβ Double Nickase Plasmid (h) | sc-404394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase IIβ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCSH kodiert die β‑Untereinheit der Glukosidase II, eines im Lumen des endoplasmatischen Retikulums (ER) lokalisierten Enzymkomplexes, der während der Reifung von Glykoproteinen Glukosereste von N‑gebundenen Glykanen entfernt. Dieser Verarbeitungsschritt unterstützt den Calnexin/Calreticulin‑Qualitätskontrollzyklus und hilft, die ER‑assoziierte Degradation (ERAD) fehlgefalteter Proteine zu koordinieren, wodurch die PRKCSH‑Funktion mit der Proteostase und der Signalgebung der Unfolded‑Protein‑Response verknüpft ist. Eine Störung der Glukosidase‑IIβ‑Aktivität kann Sekretion sowie Oberflächenexpression von Glykoproteinen beeinträchtigen und dadurch die Zellsignalgebung und Stressanpassung verändern. Genetische Varianten in PRKCSH wurden mit autosomal‑dominanter polyzystischer Lebererkrankung in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zur Epithelbiologie, Organellstress und glykoproteinabhängigen Signalwegen relevant macht.
Glucosidase IIβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PRKCSH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PRKCSH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PRKCSH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PRKCSH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.